2024-06-17 15:02 
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摘 要 目的：荧光定量PCR检测普洱茶对胃癌前病变大鼠p53基因的表达。方法：建立大鼠胃癌前病变模型，给予普洱茶灌胃1个月后，采用荧光定量PCR检测p53基因的表达情况。结果：普洱茶处理组1个月后，p53 mRNA的表达显著高于未用普洱茶处理组（t3.256，P0.006）。结论：普洱茶可以稳定抑癌基因p53的表达。由此推测普洱茶通过抑制p53的突变或稳定p53基因来抑制大鼠胃癌前病变向胃癌的转化。
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关键词 胃癌 癌前病变 普洱茶 p53基因
AbstractObjective:to measure the p53 gene expression in gastric precancerous lesions of rats after Pu'er tea treatment by real-time PCR.Methods:We established the gastric precancerous lesions model in rats and treated rats with Pu'er tea for 1 month.In the end,we used real-time PCR to measure the p53 gene expression.Results:treatment with Pu'er tea for 1 month,the p53 gene expression in these rats was significanly higher than this in the rats without Pu'er tea treatment.Conclusion:Pu'er tea can stabilized p53 tumor suppressor gene expression,which indicated that Pu'er tea suppressing p53 gene mutation or stability of p53 to inhibit the transformation of rat gastric precancerous lesions to gastric cancer.
Key WordGastric carcinoma;Precancerosis;Pu'er tea;P53 gene
胃癌是世界上多数国家常见的消化道肿瘤，死亡率高，严重威胁着人们的生命和健康。胃癌的高发年龄为50～59岁，其次为40～49岁，男性多于女性。按Lauren分型，胃癌可分为肠型和弥漫型两大类，前者多见于高发区，以老年人为主，恶性程度较低，术后预后较好；后者在高、低发区基本一致，患病年龄前移，恶性程度较高，预后不良。因此，胃癌的预防成为目前广大科研工作者研究的热点。
饮茶是我国人们的传统习惯。早在神农时，就有饮茶解七十二毒之说。目前研究发现饮茶可以使胃癌发生的危险度降低29%。《梵天卢丛录》（柴萼，著于公元1925年）云：“普洱茶，性温味香，治百病，蒸制以竹成团裹，价等兼金。”普洱茶作为传统饮料，除能止渴生津和提神外，还有特殊的药用功效。现代医学研究发现普洱茶中的茶多酚类物、茶色素、咖啡碱及多酚糖都是生物化学抗癌成分，能起到防癌、抗癌的作用。基于此，本文通过建立大鼠胃癌前病变模型，探讨普洱茶饮对胃癌前病变大鼠抑癌基因p53的表达。
资料与方法
实验动物：选用健康雄性SD大鼠36只，体重210±20g（由四川大学华西医学中心实验动物中心提供）。大鼠常规分笼饲养，进食标准饲料，自由饮水。室温保持20～22℃，相对湿度45%～50%，光照时间为每天12小时。大鼠按体重分层，参照随机数字表分为3组，进行为期1个月的实验研究：对照组（C组，n10）自由饮水进食不受任何干预；模型组（M组，n10）参照陈大权［1］等人的方法建立大鼠胃癌前病变慢性萎缩性胃炎的模型，不加任何干预；实验组（E组，n10）参照陈大权［1］等人的方法建立大鼠胃癌前病变慢性萎缩性胃炎的模型，按每只大鼠每日相当于成人体重给药量20倍计算进行灌胃。
取材：大鼠断头处死后，取胃，沿胃大弯剖开，暴露正高前胃和腺胃，PBS冲洗干净，均沿腺胃的小弯侧取材，取材大小为0.5cm3>/sup>，范围从贲门到幽门部。所取材迅速置液氮中备用。
检测方法：染料法荧光定量PCR反应（real-time PCR），采用RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），提取组织总RNA并经紫外检测含量。所有操作步骤均按试剂盒说明书进行。反转录按照TaKaRa PrimeScriptTM RT reagent Kit perfect Real Time试剂盒（TaKaRa Biotech Co，Dalian，China）说明书进行，具体方法同上。各组提取的总RNA用于检测相关因子的表达，以GAPDH为参照。P53：sense：5'GTACCGTATGAGCCACCTGAG-3'，antisense：5'CGTCCCAGAAGATTCCC-3；GAPDH-actin：sense：5'-ATGTATCCGTTGTGGATCTGAC-3'；antisense：5'-CCTG CTTCACCACCTTCTTG-3'。PCR反应（TaKaRa SYBR Premix Ex TaqTM code：DRR041A）参照试剂盒说明。
统计学方法：实验数据用mean±SD表示，样本均数做t检验检测，P＜0.05认为差异有显著性。数据处理采用SPSS13.0。
结 果
real-time PCR实验结果：荧光定量PCR的结果：由溶解曲线可以看出，所有检测目的基因均为单峰，说明产物特异性好，避免非特异产物对结果的影响。见图1、2。
将各组胃p53 mRNA水平经过GAPDH标准化后进行比较，结果提示，与C组相比，M组在1个月后p53 mRNA的表达显著下降（t2.636，P0.014）；而E组p53 mRNA的表达略高于C组，但差异无显著性（t1.781，P0.459）；E组p53 mRNA的表达显著高于M组（t3.256，P0.006）。p53 mRNA的表达变化，见表1。
讨 论
据统计，全世界每年约有90万人新诊断为胃癌，1990年胃癌发病率仅次于肺癌而居世界第2位，其中以日本、中国、南非、和东欧的发病率较高。在中国，恶性肿瘤死亡居全死因的第2位，其中胃癌所占份额很大。萎缩性胃炎被广泛地认为是胃癌的先兆，其更进一步的发展和广泛的肠化生及严重的异型增生可导致癌症的发生［2］。一项为期6年的队列研究指出，萎缩性胃炎使胃癌发生的危险增加了2.91倍，并随萎缩程度的加重而增加。国外萎缩性胃炎的癌变率为8.6%～13.8%，国内为1.2%～7.1%。另有报道，患胃癌风险大的人萎缩性胃炎的发病率也高［3］。因此本文采用了诱导萎缩性胃炎作为大鼠胃癌前病变的模型。
大多数肿瘤与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。p53基因结构及表达的异常是人类最常见的基因改变之一，约50%的人类肿瘤有P53 基因的改变，且此改变在胃肠道肿瘤中比较常见，成为近年来肿瘤基础理论及临床研究的重点。p53基因的缺失和突变不仅可见于早期胃癌，在肠化生及腺瘤中也可检测到［4］。p53基因的突变率随胃黏膜病变程度的加深而增加（分别为胃癌60.1%、异型增生31.3%、肠化生11.8%）［5］。还有学者认为p53表达变化和胃癌转移密切相关，可作为胃癌恶性表型的指标。此推论被蔡嵘等人［6］研究p53基因在胃癌发生机制中的作用中证实。因此本文选用p53基因作为检测指标。
清人赵学敏《本草纲目拾遣》云：“普洱茶性温味香，产攸乐、革登……六茶山，以倚邦、蛮砖茶味较盛。味苦性刻，解油腻牛羊毒，虚人禁用。苦涩逐痰下气，刮肠通泄。普洱茶膏黑如漆，醒酒第一，绿色者更佳。消食化痰，清胃生津，功力尤大也。”近年来，国内外对普洱茶的生理、药理功能进行了更加深入的研究，普洱茶的功能也进一步的得到了开发。研究发现，普洱茶可以显著抑制体外培养人胃癌细胞的增殖；饮茶可以显著降低胃癌和慢性胃炎危险度达54%［7］。本实验研究发现，普洱茶通过维持p53基因的稳定性，抑制p53基因的突变来抑制胃癌前病变大鼠向胃癌演变。其机理可能为，普洱茶中富含的茶多酚类物、茶色素、咖啡碱及多酚糖等生物化学抗癌成分，通过抑制致原癌基因表达和维持抑癌基因的稳定性，抑制其突变来降低癌症发生率。所以喝普洱茶可以帮助人们防癌、抗癌，非常有益于人体健康。
