目的： 研究普洱茶Camellia sinensis var. assamica中黄酮类化学成分。

方法：利用各种色谱技术进行分离，利用波谱方法结合化合物的理化性质确定结构。

结果：最终分离、鉴定了11个黄酮类化合物，分别为：山柰酚（1），槲皮素（2），山柰酚，3-O，β，D-葡萄糖苷（3），山柰酚，3-O，β，D-芸香糖苷（4），芹菜素6-C，α，L-阿拉伯糖，8-C，β，D-葡萄糖苷（5），牡荆素，4″-O，β，D-葡萄糖苷（6），山柰酚，3-O，α，L-鼠李糖基（1→3）α，L-鼠李糖基（1→6）β，D-葡萄糖苷（7），槲皮素，3-O，β，D-葡萄糖苷（8），芦丁（9），槲皮素，3-O，α，L-鼠李糖苷（10），杨梅素，3-O，β，D-葡萄糖苷（11）。

结论：化合物5～7，10，11均首次从普洱茶中分离得到。

普洱茶是以云南特有的大叶茶Camellia sinensis（L.） var. assamica （Masters） Kitamura的晒青毛茶为原料，在高温高湿的环境下，利用微生物经特殊后发酵工艺生产而成的一种黑茶。普洱毛茶制成后，因其后期处理工序的关系可分为“生茶”和“熟茶”，生茶是指不经过渥堆发酵工序的普洱毛青，直接陈放让其自然红转成熟。“生茶”的转熟是完全依靠自然的环境条件，其间的变化相当缓慢，完全稳熟后的生茶，其陈香中仍留活泼生动的韵致，且逾时越久，其内香及活力亦越稳健、显露。“熟茶”是普洱毛茶再经加水，渥堆，翻堆，装袋，出袋，晒干等工序，让其快速红转而成。“熟茶”成熟后，仍需经一段时间的存放，以待其味质稳定，因熟茶堆闷红转过程较为急速，故其气韵味质较生茶平淡。现在所称之的普洱茶都是指经过现代“渥堆”工艺发酵的普洱熟茶，且市面上流通的普洱茶也是指此。

《本草纳目拾遗》记载：“普洱茶膏，黑如漆，醒酒第一，绿色更加；消食化痰，去淤，清胃生津”。现代临床研究也发现普洱茶具有很好的降脂降糖功效。目前，对于山茶科的茶叶的化学成分研究已经很多，但是对于普洱茶化学成分研究报道较少，主要发现普洱茶中含有带内酯环的儿茶素类衍生物[1]。为了进一步阐明普洱茶的物质基础，并为茶叶化学分类提供依据，本课题利用各种色谱、波谱技术对普洱茶的化学成分进行了系统研究，本文主要报道分离鉴定的11个黄酮类化合物。

1 材料

1H 和13C，NMR谱用BrukerAM，500 NMR谱仪以TMS为内标在DMSO-d2和丙酮-d2中测定。质谱用Agilent 6320 Ion Trap LC，MS质谱仪测定。柱色谱分离用填充剂有Sephadex LH，20，硅胶（100～200，200～300目），Merck C18填料。以预制硅胶板进行TLC 检测，以FeCl3和H2SO4香草醛为显色剂。

普洱茶由大叶种的晒青毛茶后发酵制得，云南省龙生普洱茶有限公司提供，由北京大学医学部屠鹏飞教授鉴定为山茶科山茶属植物普洱茶C.sinensis var. assamica成熟叶片的后发酵熟茶，标本存放于北京大学中医药现代研究中心标本室。

2 提取与分离

取普洱茶1.5 kg，用15倍量90 ℃水提取3次，每次30 min，提取液经过浓缩，喷雾干燥得到600 g普洱茶粉，用水混悬溶解后，依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取乙酸乙酯层萃取物（140 g），经硅胶柱色谱（氯仿，甲醇30∶1～2∶1）梯度洗脱划分为Fr.1，10共10个组分。Fr.2（5 g）析出黄色结晶，重结晶（氯仿，甲醇1∶1） 得化合物1（104 mg）。Fr.3（12.3 g）经硅胶柱色谱（氯仿，甲醇20∶1）和Sephadex LH，20（甲醇）分离纯化得化合物2（22 mg），3（34 mg）。Fr.4（7.1 g）经Sephadex LH，20（甲醇）和C18反相柱色谱（70%甲醇）分离纯化得化合物4（17 mg），5（21 mg）。Fr.5（3.2g）经Sephadex，LH，20（30%丙酮）分离纯化得化合物6（11 mg）。Fr.6（9.8 g）经Sephadex LH，20（30%～50%丙酮）梯度洗脱和C18反相柱色谱（10%～30%甲醇）梯度洗脱分离纯化得化合物7（30 mg）。Fr.7（2.1g）经过Sephadex LH，20（50%甲醇）和半制备HPLC（乙腈，水13∶87）分离纯化得化合物8（3 mg），9（3 mg），10（8 mg）和11（8 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物，ESI，MS m/z 285[M-H]-，经过与对照品TLC对照，3种展开条件下Rf相同，故鉴定该化合物为山柰酚。

化合物2 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 301[M+H]+；1H，NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ： 6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H，6），6.40（1H，d，J=2.0 Hz，H，8），6.89（1H，d， J=8.5 Hz，H，5′），7.52（1H，dd，J=2.5，8.5 Hz，H，6′），7.67（1H，d，J=2.5 Hz，H，2′）。以上数据与文献[2]报道的槲皮素数据一致。

化合物3 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 447[M-H]-，471[M+Na]+；1H，NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ： 6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H，6），6.40（1H，d，J=2.0 Hz，H，8），8.05（2H，d，J=8.5 Hz，H，2′，6′），6.89（2H，d，J=8.5 Hz，H，3′，5′），5.44（1H，d，J=7.6 Hz，H，1″），5.38（1H，m，H，3″），4.29（1H，br，H，2″），5.09（1H，m，H，6″a），4.95（1H，m，H，6″b）。以上数据与文献[2]报道的山柰酚，3-O，β，D-葡萄糖苷基本一致。

化合物4 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 595[M+H]+；1H，NMR（methanol-d4，500 MHz） δ： 6.20（1H，d，J=2.0 Hz，H，6），6.40（1H，d，J=2.0 Hz，H，8），8.05（2H，d，J=8.5 Hz，H，2′，6′），6.89（2H，d，J=8.5 Hz，H，3′，5′），5.12（1H，d，J=7.6 Hz，H，1″），4.50（1H，s，H，1），1.11（3H，d，J=8.0 Hz，H，6）；13C，NMR（methanol-d4，125MHz）δ： 158.6（C，2），135.6（C，3），179.5（C，4），161.5（C，5），100.0（C，6），166.0（C，7），94.9（C，8），159.5（C，9），105.7（C，10），122.8（C，1′），132.4（C，2′），116.2（C，3′），161.5（C，4′），116.2（C，5′），132.4（C，6′），104.6（C，1″），75.8（C，2″），78.2（C，3″），72.4（C，4″），77.3（C，5″），68.6（C，6″），102.4（C，1），72.1（C，2），71.5（C，3），74.0（C，4），69.7（C，5），17.9（C，6）。以上数据与文献[2]报道的山柰酚，3-O，β，D-芸香糖苷基本一致。

化合物5 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物，ESI，MS m/z 563[M-H]-；1H，NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.62（1H，s，H，2），6.93（2H，d，J=8.5 Hz，H，3′，5′），7.98（2H，d，J=8.5 Hz，H，2′，6′），5.02（1H，d，J=9.5 Hz，H，1″）；4.87（1H，J=9.5 Hz，H，1）；13C，NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ： 166.7（C，2），103.6（C，3），184.3（C，4），160.4（C，5），108.4（C，6），162.9（C，7），105.8（C，8），157.5（C，9），103.6（C，10），123.5（C，1′），130.2（C，2′），117.0（C，3′），162.8（C，4′），117.0（C，5′），130.2（C，6′），76.5（C，1″），71.2（C，2″），75.2（C，3″），70.4（C，4″），72.0（C，5″），75.0（C，1），73.1（C，2），80.2（C，3），72.4（C，4），83.0（C，5），63.0（C，6）。以上数据与文献[3]报道的芹菜素，6-C，α，L-阿拉伯糖，8-C，β，D-葡萄糖苷基本一致。

化合物6 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 593[M-H]-；1H，NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.74（1H，s，H，3），6.24（1H，s，H，6），8.05（2H，d， J=8.5 Hz，H，2′，6′），6.89（2H，d，J=8.5 Hz，H，3′，5′），5.13（1H，d，J=10.0 Hz，H，1″），4.78（1H，d，J=10.0 Hz，H，1）；13C，NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ： 165.5（C，2），103.0（C，3），182.4（C，4），161.6（C，5），98.6（C，6），161.0（C，7），105.6（C，8），156.7（C，9），104.1（C，10），122.1（C，1′），129.3（C，2′），116.1（C，3′），149.7（C，4′），116.3（C，5′），129.3（C，6′），82.2（C，1″），70.6（C，2″），71.9（C，3″），81.7（C，4″），78.9（C，5″） ，61.1（C，6），103.0（C，1），74.8（C，2），76.5（C，3），69.9（C，4），76.7（C，5），60.6（C，6）。以上数据与文献[4]报道的牡荆素，4″-O，β，D-葡萄糖苷基本一致。

化合物7 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 739[M-H]-；1H，NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.15（1H，d，J=2.0 Hz，H，6），6.34（1H，d，J=2.0 Hz，H，8），7.97（2H，d，J=8.5 Hz，H，2′，6′），6.88（2H，d，J=8.5 Hz，H，3′，5′），5.25（1H，d，J=7.5 Hz，H，1″） ，4.37（1H，s，H，1），4.71（1H，s，H，1″″） ；13C，NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ： 157.1（C，2） ，133.8（C，3），177.5（C，4），161.6（C，5），99.7（C，6），166.2（C，7），94.5（C，8），157.1（C，9），103.8（C，10），121.3（ C，1′），131.3（C，2′） ，115.6（C，3′），160.5（C，4′），115.6（C，5′），131.3（C，6′），102.8（C，1″），76.1（C，2″），76.8（C，3″），71.3（C，4″），74.6（C，5″），67.9（C，6″），101.4（C，1），70.8（C，2），78.4（C，3），71.0（C，4），68.9（C，5），18.2（C，6），103.8（C，1″″），70.4（C，2″″），70.5（C，3″″），72.5（C，4″″），68.7（C，5″″），18.0（C，6″″） 。以上数据与文献[5]报道的山柰酚，3-O，α，L-鼠李糖基（1→3）-α，L-鼠李糖基（1→6）β，D-葡萄糖苷一致。

化合物8 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物，ESI，MS m/z 463[M-H]-；1H，NMR（methanol-d4，500 MHz） δ： 6.19（1H，d，J=2.1 Hz，H，6），6.39（1H，d，J=2.1 Hz，H，8），7.56（ 1H，d，J=8.5 Hz，H，5′），7.58（ 1H，d，J=8.5 Hz，H，6′），7.70（ 1H，d，J=2.2 Hz，H，2′），5.25（ 1H，d，J=7.5 Hz，H，1″）；13C，NMR（methanol-d4，125 MHz） δ：158.5（C，2），135.6（C，3），179.5（C，4），163.0（C，5），99.9（C，6），166.0（C，7），94.7（C，8），159.0（C，9），105.7（C，10），123.1（C，1′），116.0（C，2′），149.9（C，3′），145.9（C，4′），117.6（C，5′），123.2（C，6′），104.3（C，1″），75.7（C，2″） ，78.4（C，3″） ，71.2（C，4″） ，78.1（C，5″） ，62.6（C，6″）。以上数据与文献[3]报道的槲皮素，3-O，β，D-葡萄糖苷一致。

化合物9 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 609[M-H]-；1H，NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.19（1H，d，J=2.1 Hz，H，6），6.39（1H，d，J=2.1 Hz，H，8），6.98（ 1H，d，J=9.5 Hz，H，5′），7.52（ 1H，d，J=9.5 Hz，H，6′），7.55（ 1H，d，J=2.2 Hz，H，2′），5.35（1H，d，J=7.5 Hz，H，1″），4.38（ 1H，d，J =1.2 Hz，H，1）；13C，NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ： 156.4（C，2），133.3（C，3），177.4（C，4），161.2（C，5），98.7（C，6），164.4（C，7），93.6（C，8），156.6（C，9），103.8（C，10），121.2（C，1′），115.3（C，2′），148.5（C，3′），144.8（C，4′），116.3（C，5′），121.6（C，6′），100.8（C，1″），74.1（C，2″），76.5（C，3″），70.6（C，4″），75.9（C，5″），67.0（C，6″），101.2（C，1），70.0（C，2），70.4（C，3），71.9（C，4） ，68.3（C，5） ，17.7（C，6） 。以上数据与文献[6]报道的芦丁一致。

化合物10 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 447[M-H]-；1H，NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.18（1H，d，J=1.8 Hz，H，6），6.38（1H，d，J=1.8 Hz，H，8），6.87（1H，d，J=8.0 Hz，H，5′），7.50（1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H，6′），7.63（1H，d，J=2.0 Hz，H，2′），5.24（1H，d，J=2.0 Hz，H，1″），1.05（3H，d，J=6.0 Hz，H，6″）。以上数据与文献[7]报道的槲皮素，3-O，α，L-鼠李糖苷一致。

化合物11 黄色粉末，三氯化铁，铁氰化钾反应显蓝色，硫酸香草醛反应显黄色，显示为黄酮类化合物。ESI，MS m/z 479[M-H]-；1H，NMR（DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H，6），6.35（1H，d，J =1.8 Hz，H，8），7.20（1H，d，J =2.0 Hz，H，2′，6′），5.45（1H，d，J =7.5 Hz，H，1″）。以上数据与文献[8]报道的杨梅素，3-O，β，D-葡萄糖苷一致。

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Chemical constitutes of flavones from Pu，erh tea

ZHANG Liang， TU Peng，fei*

（State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs， Peking University School of

Pharmaceutical Sciences， Beijing 100191， China）

[Abstract]The chemical constituents in the Pu，erh tea were isolated by various column chromatographic methods， and their structures were identified by spectral data and physic，chemical analysis. As a result， eleven flavonoids were isolated and identified as kaempferol （1）， quercetin （2）， kaempferol，3-O，β，D-glucopyranoside （3）， kaempferol，3-O，β，D-rutinoside （4）， apigenin，6-C，α，L-arabinopyranosyl，8-C，β，D-glucopyranoside （5）， vitexin，4″-O，β，D-glucopyranoside （6）， kaempferol，3-O，[α，L-rhamnopyranosyl，（1→3）-α，L-rhamnopyranosyl，（1→6）-β，D-glucopyranoside] （7）， quercetin3-O，β，D-glucopyranoside （8）， rutin （9）， quercetin，3-O，α，L-rhamnopyranoside （10）， and myricetin，3-O，β，D-glucopyranoside （11）. Compounds 5，7， 10 and 11 were isolated from Pu，erh tea for the first time.

[Key words]Camellia sinensis var. assamica； flavones； chemical constituents

doi：10.4268/cjcmm20131020